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LeapWal PolyShooter 轉(zhuǎn)染試劑 P09110 使用方法

更新時(shí)間:2023-02-20 點(diǎn)擊量:949
  LeapWal PolyShooter 轉(zhuǎn)染試劑 P09110 是基于PEI(Polyethylenimine)的產(chǎn)品,因其有效的瞬轉(zhuǎn)效率和蛋白產(chǎn)量,已廣泛應(yīng)用于工業(yè)化生產(chǎn)和基礎(chǔ)科研中的蛋白表達(dá)研究,年文獻(xiàn)發(fā)表量已達(dá)上千篇。PEI是一種具有較高的陽(yáng)離子電荷密度的有機(jī)大分子,每相隔二個(gè)碳原子,即每“第三個(gè)原子都是質(zhì)子化的氨基氮原子,使得聚合物網(wǎng)絡(luò)在任何pH下都能充當(dāng)有效的“質(zhì)子海綿”(proton sponge)體。PEI用作轉(zhuǎn)染試劑,將DNA縮聚成帶正電荷的復(fù)合物,這些復(fù)合物很容易通過(guò)內(nèi)吞作用進(jìn)入細(xì)胞。PEI-DNA復(fù)合物能很好地抵御溶酶體的降解作用,提高轉(zhuǎn)染效率。PEI轉(zhuǎn)染試劑能有效地將DNA轉(zhuǎn)染入HEK-293、CHO、COS、Hela、昆蟲(chóng)(SF9、SF21)等真核細(xì)胞系,也可用于較大質(zhì)粒的轉(zhuǎn)染。Polysciences目前主推三款不同市場(chǎng)定位的PEI轉(zhuǎn)染試劑。
 
  LeapWal PolyShooter 轉(zhuǎn)染試劑 P09110轉(zhuǎn)染步驟:轉(zhuǎn)染前一天將細(xì)胞分至培養(yǎng)板,轉(zhuǎn)染當(dāng)天細(xì)胞應(yīng)50-80%融合。將細(xì)胞以1-3×105/2 ml接種于6孔板后孵育過(guò)夜將達(dá)到如此密度。將FuGENE6 Reagent在室溫孵育10-15分鐘。使用之前將FuGENE6顛倒混勻一下。
 
  1. 在PCR管中加入不含血清和雙抗的營(yíng)養(yǎng)液以稀釋FuGENE6,直至總體積到100 ul。
 
  2. 將3-6 ul FuGENE6 Reagent直接加入營(yíng)養(yǎng)液,輕彈管壁混合。
 
  3. 加入1-2 ug的DNA溶液(0.02-2.0 ug/ul),輕彈管壁混合。
 
  4. 室溫孵育20分鐘。
 
  5. 將6孔板中的舊營(yíng)養(yǎng)液吸出,加入約1 ml不含血清和雙抗的營(yíng)養(yǎng)液洗滌一次,再加入2 ml不含血清和雙抗的營(yíng)養(yǎng)液。
 
  6. 將轉(zhuǎn)染復(fù)合物加入細(xì)胞,混勻使之均勻分布。
 
  7. 3-8小時(shí)后,加入血清或換成含血清的營(yíng)養(yǎng)液。
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