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淺析LeapWal PolyShooter NEO-PEI DNA 轉染試劑 P09310 轉染步驟

更新時間:2023-01-16 點擊量:1157
  LeapWal PolyShooter NEO-PEI DNA 轉染試劑 P09310 綜合了低的細胞毒性和高的轉染效率,讓更多細胞存活,且?guī)砩砩细嚓P的結果。而且,轉染步驟也相當簡單:只需用無血清培養(yǎng)基稀釋轉染試劑,與質粒共同孵育,然后逐滴加入細胞中。研究人員所需的優(yōu)化少,當然,在轉染之前,你還是得優(yōu)化轉染試劑與DNA的比例。建議的比例是3:1,但對于特定研究,2:1至7:1的比例可能會提高轉染效率。
 
  LeapWal PolyShooter NEO-PEI DNA 轉染試劑 P09310 步驟:
 
  1.轉染前一天,胰酶消化細胞并計數(shù),細胞鋪板,使其在轉染日密度為90-95%。細胞鋪板在2ml含血清,不含抗生素的正常生長的培養(yǎng)基中。
 
  2.對于每孔細胞,使用250ul無血清培養(yǎng)基(如OPTI-MEMI培養(yǎng)基)稀釋4.0ugDNA,輕輕混勻。
 
  3.使用前將Lipofectamine2000轉染試劑輕輕混勻,用250ul無血清培養(yǎng)基(如OPTI-MEMI培養(yǎng)基)稀釋10ulLipofectamine2000轉染試劑,輕輕混勻。Lipofectamine2000稀釋后,在5分鐘內同稀釋的DNA混合(<30分鐘)。NOTE:若使用DMEM培養(yǎng)基,則需在5分鐘內同稀釋的DNA混合。
 
  4.混合稀釋的DNA(第二步)和稀釋的Lipofectamine2000(第三步)。室溫放置20分鐘。
 
  5.(optional)將6孔板中的舊營養(yǎng)液吸出,用無血清培養(yǎng)基清洗兩次。加入2ml無血清配養(yǎng)基。
 
  6.直接將復合物加入到每孔中,搖動培養(yǎng)板,輕輕混勻。
 
  7.在37℃,5%CO2中保溫24-48小時。無需去掉復合物或更換培養(yǎng)基?;蛘咴?-5小時后更換培養(yǎng)生長基也不會降低轉染活性。
 
  8.在細胞中加入復合物24-72小時后,分析細胞抽提物或進行原位細胞染色,檢測報告基因活性。這依賴于細胞類型和啟動子活性。對穩(wěn)定表達,在開始轉染一天后將細胞傳代至新鮮培養(yǎng)基中,兩天后加入篩選抗生素。進行穩(wěn)定表達需要數(shù)天或數(shù)周。
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